Inertne kolumny HPLC - do czego się je stosuje
Co to są kolumny z inertnym hadware?
Kolumny do chromatografii cieczowej to złoże chromatograficzne upakowane w specjalnie zakończonych rurach. Te rury (hardware kolumny) występują w dwóch głównych typach: stalowych oraz plastikowych. Są też kolumny szklane - niskociśnieniowe kolumny LC - które również oferujemy, można nas wysłać zapytanie o cenę. Wersja PEEK jest naturalnie inertna / niereaktywna / biokompatybilna. Wersje stalowe muszą być specjalnie przystosowane, by zapewnić inertność. Co to oznacza?
Prowadząc rozdział chromatograficzny zazwyczaj zależy nam na wykorzystaniu fizykochemicznej interakcji złoża chromatograficznego z analizowanymi substancjami. Niestety zdarza się, że interesujące nas cząsteczki wchodzą w dodatkowe oddziaływania np. ze stalą nierdzewna i obserwujemy np. ogonowanie pików. A stal nierdzewną stosuje się typowo w wysokociśnieniowych kolumnach HLPC / UHPLC. W takim przypadku stosuje się plastikowe kolumny, najczęściej wykonane z PEEK. Posiadamy takie kolumny PEEK w naszej ofercie: puste (do własnoręcznego upakowania swoim złożem) i firmowo wypełnione - gotowe do wykorzystania w chromatografii. Zachęcamy do kontaktu w celu zapoznania się z ich rodzajami i cenami.
Ale kolumny PEEK nie są tak odporne mechanicznie jak wersje ze stali nierdzewnej. Co wtedy? Wtedy stosuje się specjalny sposób traktowania powierzchni metalu w celu uzyskania trwałej, niereaktywnej warstwy na metalu.
Dzięki zastosowaniu materiału hardware kolumny niewchodzącego w reakcje chemiczne uzyskuje się minimalizację oddziaływań wtórnych pomiędzy analitami a powierzchnią hardware kolumny. Otrzymujemy lepsze rozdziały, lepszy kształt pików, jesteśmy bardziej zadowoleni z wykonanej pracy.
Konkludując, warto wiedzieć, że są takie inertne kolumny. W naszej ofercie stalowe inertne wersje kolumn HALO® oferuje amerykański producent AMT.
Więcej na stronie o kolumnach AMT HALO®
Typowe zastosowania inertnych kolumn chromatograficznych
Kolumny HPLC w inertnym stalowym hardware (często nazywane bioinertnymi, pokrytymi specjalną warstwą lub "low-adsorption") należy wykorzystywać do analizy analitów, które wykazują silne oddziaływania z metalami, co prowadzi do słabej symetrii pików (peak tailing), niskiego odzysku (strat analitu) lub zmian w retencji.Inertny hardware jest niezbędny dla następujących grup związków:
- Substancje chelatujące: Organiczne związki, które tworzą kompleksy z jonami metali (np. żelazem, niklem) obecnymi na powierzchni stali: Tetracykliny, chinolony, kwasy hydroksamowe.
- Oligonukleotydy: Kwasy nukleinowe (RNA/DNA) i ich modyfikacje, które są bardzo wrażliwe na kontakt z metalami i często wykazują słaby odzysk na kolumnach wykonanych ze standardowej stali nierdzewnej.
- Fosfopeptydy i fosfobiałko: Związki zawierające grupy fosforanowe, które wiążą się z tlenkami metali na kolumnie.
- Kwasowe metabolity i związki fosforanowe: Małe cząsteczki z grupami karboksylowymi lub fosforanowymi: Nukleotydy (AMP, ADP, ATP), fosfolipidy, kwasy organiczne.
- Peptydy i białka: Szczególnie te o charakterze kwasowym, które łatwo ulegają niespecyficznemu wiązaniu do metalowych powierzchni.
- Pestycydy fosfoorganiczne
- Eliminacja niepożądanych oddziaływań, co prowadzi do uzyskania wyższych i ostrzejszych pików (lepsza czułość).
- Zmniejszenie potrzeby kondycjonowania kolumny próbką.
- Zwiększenie odzysku analitu i poprawa powtarzalności.
- Umożliwia stosowanie buforów o niskim pH i wysokiej zawartości soli (np. w LC/MS)
Nasz producent kolumn AMT HALO® oferuje inertne, stalowe wersje swoich kolumn chromatograficznych.